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eBlotL1快速湿转仪是用来转印蛋白的仪器,电泳转印为转移蛋白常用的方法,该技术有效、迅速,并且使得蛋白在凝胶中保持高分辨率。在凝胶中向印迹膜载体转印分离的蛋白质的过程,即是电泳转印法。
因为此技术往膜上转印蛋白GX、快速和准确,并且能够使得蛋白在凝胶中保持高分辨率,在转移印迹技术中得到广泛的应用。
eBlotL1快速湿转仪准备工作:
1、准备对缓冲液进行转移,缓冲液的pH值.不要无故调整,如果仪器过热出错,那么可能选择了不适合的缓冲液。
2、通电以后,凝胶在转移缓冲液中平衡,平衡能够将电泳缓冲液中的盐和清洁剂从凝胶中除去。若不将盐去除,将对缓冲液产生很大的影响,并且使得仪器在转移过程中过热。
除此以外,在缓冲液中,低浓度的凝胶(<12%的聚丙烯酰胺)会缩水,平衡调整凝胶为电泳转移提供便利。凝胶的浓度决定了平衡所需时间。
3、以凝胶为依据将适宜大小的膜剪裁出来,在缓冲液中通过45度夹角缓慢滑入膜,并且浸泡15-30分钟,从而湿润*,不然的话,那么会容易起对转移起到阻滞作用的气泡。应当使用镊子或者带手套来避免污染膜。
4、以凝胶为依据将适宜大小的膜剪裁出来,2张加厚型滤纸或4张厚滤纸或6张薄滤纸被需要,将滤纸在转移缓冲液中浸透*。
5、若一次转膜多张,使用透析膜隔开,也应当*浸透透析膜。
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